Для количественного определения барбитуратов, изолирован­ных из биологического материала животного происхождения (кровь, моча, внутренние органы трупа), наиболее перспектив­ным является спектрофотометрический метод.

Спектрофотометрический метод требует сравнительно высокой чистоты исследуемого вещества. Такую степень чистоты обеспе­чивает хроматография в тонком слое силикагеля КСК (см. стр. 59).

Спектрофотометрическое определение барбитуратов основано на способности барбитуратов к кето-энольной или амидоими­дольной таутометрии: при рН 2,0 барбитурат находится в рас­творе в виде кетонной (неионизированной) формы, не обладаю­щей в пределах длин волн (λ) 200-300 нм специфической аб­сорбцией. При рН 10,0 образуется моноимидольная форма, в гетероциклическом ядре возникает двойная связь, способная к поглощению в ультрафиолетовой области спектра. Поглощение наблюдается при λ = 240 нм. При рН 13,0 и выше в растворе при­сутствует диимидольная форма с двумя двойными связями в кольце. Максимум абсорбции наблюдается при λ=255-260 нм.

Для определения барбитуратов рекомендованы: методы пря­мого спектрофотометрирования при рН 10,0 и λ = 240 нм и два варианта дифференциального метода: при рН 10,0-рН 2,0 и λ = =239 нм при исследовании внутренних органов трупа и при рН 13,0-рН 10,0 и λ = 260 нм при исследованиях крови и мочи. Дифференциальные варианты спектрофотометрического опреде­ления дают более надежные результаты, так как здесь в значи­тельной степени исключается влияние посторонних веществ, экстрагируемых хлороформом из кислого раствора вместе с бар­битуратами. Для расчета содержания барбитурата пользуются калибровочным графиком или, что лучше, значениями удельного

показателя поглощения. Удельный показатель поглощения E₁^1%_CM вычисляется по формуле:

где D-оптическая плотность; ∆D>=ДрН10-ДрН2 или ДрН1З- ДрН10; С - концентрация   вещества в   процентах; l - толшина поглощающего слоя в сантиметрах. Отсюда

В сочетании с хроматографией спектрофотометрический метод является достаточно специфичным, быстрым, чувствительным. Определяются микрограммовые количества барбитуратов.

В. И. Попова на основе метода Маттесона и Гольта разрабо­тала применительно к химико-токсикологическому анализу ме­тод фотометрического определения барбитала, фенобарбитала и барбамила. В основу методики положена реакция барбитуратов с раствором ацетата кобальта в СН₃ОН в присутствии изопро­пиламина в СН₃ОН. Определяются миллиграммовые количества перечисленных барбитуратов.